Abstract The present study aimed for the molecular detection of Rickettsia spp. in ticks collected from military training areas in southeastern Brazil. Previously, a total of 9,374 free-living ticks in 66 military instruction areas of five Military Organizations (MOs) were collected. From these, a sample of 1,885 ticks was used for molecular analysis..DNA extraction was performed using the “HotSHOT” technique, and PCR was performed using the Rickettsia spp. gltA, 17kDa and ompA genes. It was found that 11 samples produced DNA sequences of sizes compatible with the Rickettsia spp. gltA and 17kDa gene and two of these, also for ompA, with a prevalence of 0.58% (11/1885). Analyses of amplified fragments of gltA identified the samples as Rickettsia bellii in seven nymphs of Amblyomma dubitatum and one nymph of Amblyomma sculptum, and identified samples as Rickettsia sp. in two nymphs of A. dubitatum and one of A. sculptum. This finding warns the possibility of the risk of exposure of military personnel to ticks infected with Rickettsia spp. during training.

Resumo As doenças transmitidas por carrapatos estão entre os dois principais grupos de riscos biológicos ocupacionais. Tal exposição ocupacional de militares os colocam sob maior risco de adquirirem doenças zoonóticas, como infecções rickettsiais, entre outras. No Brasil, há raros estudos sobre fauna acarológica e o risco ocupacional em áreas militares. Neste sentido, o presente estudo teve por objetivo analisar a diversidade de carrapatos presentes em áreas de treinamento militar de municípios da região Sudeste do Brasil. Os carrapatos foram coletados nas áreas através de arrasto de flanela, bandeiramento e/ou coleta nas vestimentas do operador, sendo registradas também informações ambientais. Das 66 áreas pesquisadas, foram coletados 9.374 carrapatos, com uma diversidade de cinco gêneros, distribuídos em dez espécies: Amblyomma sculptum, Amblyomma dubitatum, Amblyomma brasiliense, Amblyomma longirostre, Amblyomma aureolatum, Amblyomma spp., Dermacentor nitens, Rhipicephalus spp., Ixodes spp. e Haemaphysalis spp. A presença frequente de espécies de carrapatos nas áreas de instrução militar, associada aos vestígios e à presença de animais silvestres, mais comumente de capivaras na maioria das áreas estudadas, evidencia uma grande exposição dos militares a carrapatos vetores de rickettsias do Grupo da Febre Maculosa e a possível ocorrência de casos humanos nas tropas.

Abstract Tick-borne pathogens belong to one of the two main groups of occupational biohazards, and occupational exposure to such agents puts soldiers at risk of zoonotic infections, such as those caused by rickettsiae. There are few studies on acarological fauna and occupational risk in military areas in Brazil. Thus, the present study aimed to analyze the diversity of ticks present in the military training areas of municipalities in the Southeast Region of Brazil. The ticks were collected from the selected areas using the dragging and flagging techniques as well as by visual detection on the operators’ clothing, and environmental information was also recorded. A total of ten species were collected from the 66 surveyed areas, belonging to five genera and nine species: Amblyomma sculptum, Amblyomma dubitatum, Amblyomma brasiliense, Amblyomma longirostre, Amblyomma aureolatum, Dermacentor nitens, Rhipicephalus spp., Ixodes spp. and Haemaphysalis spp. The frequent presence of tick species in military training areas along with traces and sightings of wild animals, most commonly capybaras (Hydrochoerus hydrochaeris), in most of the studied areas, indicates high levels of exposure of the military to tick vectors of spotted fever group rickettsiae and the possible occurrence of infections among the troops.

Resumo Este estudo teve como objetivo confirmar a presença de anticorpos IgG contra Borrelia burgdorferi sensu lato (s.l) em cães na região oeste de Cuba. As amostras de soro foram analisadas por ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA) indireto, usando-se antígenos brutos de uma cepa de B. burgdorferi de origem norte-americana. Para confirmar a presença de Borrelia spp., o ácido desoxirribonucleico (DNA), extraído de amostras individuais de sangue, foi analisado por PCR, utilizando-se marcadores direcionados para a amplificação de porções do gene da flagelina B (flaB) presente nas espiroquetas de Borrelia. Os carrapatos também foram coletados através da inspeção dos animais. Os soros de 93 de 176 (52,84%) cães foram reativos ao ELISA indireto. A prevalência geográfica variou de 54,35% (25/46) em Boyeros, 44,44% (20/45) em Cotorro, 66,67% (22/33) em Habana del Este e 50% (26/52) em San José de las Lajas. Não houve diferença estatística entre essas variáveis testadas. Nenhuma amostra de sangue analisada foi positiva para o gene Borrelia flaB.

Abstract This study aimed to verify the presence of IgG antibodies against Borrelia burgdorferi sensu lato (s.l) in domestic dogs in western Cuba. Serum samples were analyzed by indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), using crude antigens of a B. burgdorferi strain of North American origin. To verify the presence of Borrelia spp., deoxyribonucleic acid (DNA) extracted from individual blood samples was analyzed by nested-PCR, with markers targeted for amplification of portions of the flagellin B gene (flaB) present in Borrelia spirochetes. Ticks were also collected through inspection of the animals. Sera from 93 of 176 (52.84%) dogs were reactive to the indirect ELISA. Geographic prevalence varied from 54.35% (25/46) in Boyeros, 44.44% (20/45) in Cotorro, 66.67% (22/33) in Habana del Este, and 50% (26/52) in San José de las Lajas. There was no statistical difference between these tested variables. No blood samples analyzed were positive for the Borrelia flaB gene.

Resumo O presente estudo teve como objetivo caracterizar a importância de Anaplasma marginale, Babesia bigemina e Babesia bovis na gênese da tristeza parasitária bovina em bezerros leiteiros do noroeste de Minas Gerais. Foram coletadas 300 amostras sanguíneas de bezerros, seguidas por extração de DNA e Nested- PCR utilizando oligonucleotídeos iniciadores que amplificam fragmentos dos genes sbp-4 (B. bovis) e rap-1a (B. bigemina) e a Semi-Nested para o gene msp5 (A. marginale). A prevalência de A. marginale foi 55,66% (167/300), B. bigemina, 15,33% (46/300) e B. bovis 4,0% (12/300) dos bezerros examinados. Formas parasitárias de A. marginale and B. bigemina foram encontradas em 36,33% e 2,66% dos esfregaços sanguíneos, enquanto B. bovis não foi detectado. Houve diferença estatística entre as prevalências de animais infectados nas faixas etárias 1 (10-70 dias) e 2 (>70-300 dias). Um total de 15 animais com sintomas clássicos da doença foram examinados, e as amostras foram confirmadas como uma infecção simples por A. marginale através da Nested-PCR. Esses resultados confirmam a anaplasmose bovina como a principal agente da tristeza parasitária bovina nos bezerros do rebanho estudado.

Abstract The present study aimed to characterize the importance of the Anaplasma marginale, Babesia bovis and Babesia bigemina in the genesis of cattle tick fever (CTF) among dairy calves in the northwest of Minas Gerais, Brazil. Blood samples from 300 calves were collected, followed by DNA extraction and nested PCR using oligonucleotide primers to amplify fragments of the semi-nested for the msp5 gene (A. marginale), sbp-4 (B. bovis) and rap-1a (B. bigemina) Among the examined calves, the prevalence of A. marginale was 55.6% (n=167/300), B. bovis was 4.0% (n=12/300) and B. bigemina was 15.3% (n=46/300), by PCR techniques. Parasitic forms of A. marginale and B. bigemina were found in 36,3% and 2,6% of the blood smears while B. bovis was not detected. There was a statistical difference between the positivity of infected animals in the age groups 1 (10-70 days) and (>70-300 days) for A. marginale and B. bigemina. A total of 15 calves with the classic symptoms of disease were examined, and the samples obtained were confirmed as a simple infection by A. marginale through semi-nested PCR. These results confirm bovine anaplasmosis as the primary cause of CTF among the calves of dairy cattle within the studied area.

Resumo Riquetsioses do Grupo da Febre Maculosa são doenças emergentes. Em algumas destas doenças, os cães domésticos agem como sentinelas. Estudos sorológicos caninos têm demonstrado que a dispersão de patógenos rickettsiais está concentrada em áreas rurais, sendo a soroprevalência maior onde as rickettsioses humanas são endêmicas. Na cidade do Rio de Janeiro, a vegetação de Mata Atlântica vem sendo devastada pela urbanização. Nesse contexto, objetivou-se detectar a presença de Rickettsia spp. em áreas urbanas da Zona Oeste do Rio de Janeiro. Amostras de soro obtidas de 130 cães foram testadas, utilizando-se a Imunofluorescência Indireta. Carrapatos coletados desses cães foram testados, utilizando-se a reação em cadeia da polimerase. Observou-se que as taxas de reações sorológicas contra R. rickettsii e R. parkeri nessa área de estudo excederam a prevalência das áreas rurais e não endêmicas, destacando-se a importância dos cães como sentinelas urbanos das rickettsioses. A possibilidade de contato com capivaras e gambás favoreceu a exposição à Rickettsia spp., reforçando a hipótese de ligação entre a paisagem local e o ciclo silvestre de transmissão riquetsial. O carrapato Rhipicephalus sanguineus sensu lato foi encontrado com maior frequência. Amostras com positividade pela PCR mostraram similaridade com R. rickettsii e R. felis, um patógeno emergente raramente descrito em carrapatos. Observou-se circulação riquetsial em áreas urbanas e em carrapatos obtidos do ambiente doméstico, os quais podem estar envolvidos na epidemiologia dessas bactérias.

Abstract Spotted fever group rickettsioses are emerging diseases. In some of these diseases, domestic dogs act as sentinels. Canine serological studies have demonstrated that rickettsial dispersion is concentrated in rural areas, seroprevalence being higher where human rickettsioses are endemic. In Rio de Janeiro, the Atlantic forest vegetation has been devastated by urbanization. In this context, we aimed to detect Rickettsia spp. in urban areas of the West Zone of Rio de Janeiro. Sera from 130 dogs were tested by Indirect Immunofluorescence Assay, and ticks collected from these dogs were tested by polymerase chain reaction. We found the rate of serological reactions against R. rickettsii and R. parkeri in our study area to exceed those of rural and non-endemic areas, highlighting the importance of dogs as urban sentinels. The possibility of contact with opossums and capybaras increased the chances of exposure to Rickettsia spp., reinforcing the hypothetical link between the landscape and the rickettsial wild cycle. Rhipicephalus sanguineus sensu lato was the tick most frequently observed. PCR-positive samples showed similarity with R. rickettsii and R. felis, an emerging pathogen rarely reported from ticks. We observed that rickettsiae circulate in urban places and ticks from indoor environments, which may be involved in bacterial epidemiology.

Resumo Rickettsia rickettsii é o agente causador da Febre Maculosa Brasileira (FMB), doença na qual humanos e cães são susceptíveis. Os cães são sentinelas nos inquéritos sorológicos, contudo, a doença canina é raramente descrita. Assim sendo, objetivou-se avaliar a infecção natural por Rickettsia spp. do Grupo da Febre Maculosa (GFM) em cães e carrapatos obtidos de domicílios próximos a fragmentos de mata, caracterizando áreas de interface doméstico–silvestre. Amostras de 115 cães e 135 ixodídeos foram avaliadas pela reação em cadeia da polimerase (PCR) tendo como alvo o gene gltA de Rickettsia spp. e o gene ompA das espécies do GFM. Um cão (0,87%; 1/115) foi positivo para R. rickettsii. Este animal apresentou alterações clínicas e laboratoriais inespecíficas (trombocitopenia, hiperproteinemia, linfonodos edemaciados, emagrecimento, anorexia e letargia). Rickettsia parkeri foi identificada em 2,96% (4/135) dos carrapatos (Amblyomma sculptum, A. aureolatum e Rhipicephalus sanguineus). Este estudo confirmou a presença de bactérias do GFM em locais preservados e não endêmicos, onde populações domésticas e silvestres interagem. Reforçamos o fato do cão ser susceptível à infecção natural por R. rickettsii. Embora este seja um achado raro, medidas preventivas devem ser tomadas contra a FMB nas áreas estudadas. Em última análise, a infecção por R. parkeri possivelmente está sendo demonstrada pela primeira vez em A. sculptum.

Abstract Rickettsia rickettsii is the causative agent of Brazilian spotted fever (BSF), for which humans and dogs are both susceptible. Dogs are sentinels in serological surveys, however, canine disease is rarely reported. Therefore, we aimed to evaluate natural infection by spotted fever group (SFG) Rickettsia spp. in dogs and ticks collected from domiciles close to forest fragments, featuring domestic–wildlife interface areas. Samples from 115 dogs and 135 ixodids were assessed by polymerase chain reactions (PCR) targeting the gltA gene for Rickettsia spp. and the ompA gene for the SFG rickettsial species. One dog (0.87%; 1/115) was positive for R. rickettsii. This dog presented nonspecific laboratory and clinical abnormalities (thrombocytopenia, hyperproteinemia, lymph node enlargement, emaciation, anorexia, and lethargy). Rickettsia parkeri was identified in 2.96% (4/135) of the ticks (Amblyomma sculptum, A. aureolatum, and Rhipicephalus sanguineus). This study confirmed the presence of SFG bacteria in non-endemic and preserved locations, where domestic and wild populations interact. We reinforce the fact that the dog is susceptible to natural R. rickettsii infection. Although this is a rare finding, preventive measures should be taken against BSF in the studied areas. Finally, R. parkeri infection is possibly being demonstrated in A. sculptum for the first time.

Resumo Este trabalho teve como objetivo detectar evidências moleculares da presença de agentes dos gêneros Rickettsia, Borrelia, Babesia, Anaplasma e Ehrlichia transmitidos por carrapatos coletados de aves silvestres no estado do Rio de Janeiro. Aves foram capturadas e observadas cuidadosamente a procura de ectoparasitos. A detecção de DNA de hemoparasitos foi realizada por meio da reação em cadeia da polimerase (PCR). As sequências obtidas foram analisadas e sua homologia comparada aos isolados disponíveis na base de dados da plataforma GenBank. Foram capturadas 33 aves, de 20 espécies diferentes das quais 14 estavam parasitadas por Amblyomma longirostre (n = 22). Houve ausência de DNA de agentes dos gêneros Babesia, Anaplasma e Ehrlichia nas amostras avaliadas. A análise filogenética indicou que uma amostra apresentou 100% de identidade com Rickettsia bellii (KJ534309), as outras duas amostras apresentaram 100% de identidade com Rickettsia sp. cepa Aranha e Cepa AL (EU274654 e AY360216.). A amostra positiva para R. bellii também apresentou positividade para Borrelia sp. que apresentou similaridade de 91% com Borrelia turcica (KF422815). Esta é a primeira descrição de Borrelia sp. em carrapatos do gênero Amblyomma na América do Sul.

Abstract The aim of this study is to detect the presence of tick-borne agents of genera Rickettsia, Borrelia, Babesia, Ehrlichia and Anaplasma in ticks collected from native wild birds in the state of Rio de Janeiro. Birds were captured and observed carefully to find the ectoparasites. DNA detection of hemoparasites was performed by means of the polymerase chain reaction (PCR). The sequences obtained were analyzed and their homologies were compared to the available isolates in the GenBank platform database. A total of 33 birds were captured from 20 different species, of which 14 were parasitized by Amblyomma longirostre (n = 22). There was absence of DNA from agents of the genera Babesia, Anaplasma and Ehrlichia in the evaluated samples. The phylogenetic analysis indicated that one sample had 100% identity with Rickettsia bellii (KJ534309), the other two samples showed 100% identity with Rickettsia sp. Aranha strain and strain AL (EU274654 and AY360216). The positive sample for R. bellii was also demonstrated to be positive for Borrelia sp., which presented a similarity of 91% with Borrelia turcica (KF422815). This is the first description of Borrelia sp. in ticks of the genus Amblyomma in South America.

Resumo O estudo teve como objetivo identificar espécies de carrapatos presentes no ambiente e entre animais de cativeiro em Mangaratiba, Rio de Janeiro, Brasil. Os carrapatos foram removidos manualmente de animais de cativeiro e no ambiente usando a técnica de arrasto em flanela. Um total de 91 carrapatos foram capturados (51 adultos, 25 ninfas e 15 larvas). Os espécimes foram identificados morfologicamente como Amblyomma sp., Amblyomma dubitatum, Amblyomma ovale e Amblyomma sculptum, e foram distribuídos entre cinco espécies de mamíferos nativos e uma ave exótica. Este estudo também relata o primeiro caso de infestação do emu australiano (Dromaius novaehollandiae) por A. sculptum .

Abstract The study aimed to identify species of ticks present in the environment and among captive animals, in Mangaratiba, Rio de Janeiro, Brazil. Ticks were isolated from captive animals by manual examination and free-living ticks in the environment were captured using the flannel drag technique. A total of 91 ticks were obtained (51 adults, 25 nymphs and 15 larvae). The specimens were identified morphologically as Amblyomma sp., Amblyomma dubitatum, Amblyomma ovale and Amblyomma sculptum , and were distributed among five species of native mammals and an exotic bird. This study also reports the first case of infestation of the Australian emu (Dromaius novaehollandiae) by A. sculptum.

Abstract INTRODUCTION: Dogs play an epidemiological role in several vector-borne diseases that affect human and animal health worldwide. We aimed to identify rickettsial circulation among dogs with canine visceral leishmaniasis (CVL) from a region endemic for both diseases. METHODS: CVL-seropositive dogs were screened for spotted fever group rickettsiae using an indirect immunofluorescence assay. RESULTS: Among the CVL-positive dogs, anti-Rickettsia rickettsii antibodies were identified in one asymptomatic and one oligosymptomatic dog. CONCLUSIONS: This study shows low circulation of antibodies to R. rickettsii in CVL-seropositive dogs. It is recommended that surveillance studies in dogs should continue in order to monitor this scenario.

Resumo O estudo teve como objetivo realizar a caracterização morfológica, molecular e filogenética de Borrelia theileri obtida de Rhipicephalus microplus naturalmente infectado em bovino no estado do Rio de Janeiro, Brasil. Um total de 50 fêmeas de R. microplus ingurgitadas foram analisadas para espiroquetas por meio de esfregaço de hemolinfa. Ovos macerados e carrapatos, assim como sangue de bovinos infectados por esses carrapatos, foram analisados os genes glpQ, flaB e hpt por PCR. Os produtos de PCR foram purificados e sequenciados para análise e construção de uma árvore filogenética. Apenas 2% (1/50) dos carrapatos geraram um resultado positivo tanto pelo esfregaço como pela PCR. As formas espirais (n = 50) apresentaram (média ± DP) comprimento médio de 19,17 ± 4,12, diâmetro de 0,2935 ± 0,0469 e número de voltas de 8,44 ± 2,59. Os alinhamentos das sequências dos três genes avaliados exibiram 98% de similaridade aos isolados de B. theileri, ocorrendo em um clado altamente relacionado à linhagem de B. theileri KAT. As amostras de maceração de ovos foram positivas para os três genes avaliados, enquanto o sangue bovino foi negativo pela PCR. Esta é a mais completa caracterização de B. theileri nas Américas, apresentando dados morfológicos, moleculares e filogenéticos, incluindo a transmissão transovarial da espiroqueta no carrapato hospedeiro.

Abstract This study aimed to perform a morphological, molecular and phylogenetic characterization of Borrelia theileri obtained from infected Rhipicephalus microplus in Brazil. Fifty engorged R. microplus females from cattle in the municipality of Seropédica, Rio de Janeiro, were analyzed for spirochetes by hemolymph smear. Macerated eggs and positive ticks, as well as blood from the bovine infested by these ticks, were analyzed the glpQ, flaB and hpt genes by PCR. The PCR products were purified and sequenced for analysis and construction of a phylogenetic tree. Only 2% (1/50) of the ticks generated a positive result by both smear and PCR. The spiral forms (n = 50) had (media ± SD) a mean length of 19.17 ± 4.12 µm, diameter of 0.2935 ± 0.0469 and number of turns 8.44 ± 2.59. Sequence alignments of the three evaluated genes exhibited 98% similarity to B. theileri isolates, occurring in a clade highly related to B. theileri strain KAT. Egg maceration samples were positive for the three evaluated genes, whereas bovine blood was negative by PCR. This is the most detailed characterization of B. theileri in the Americas to-date, presenting morphological, molecular and phylogenetic data, including the transovarial transmission of the spirochete in the host tick.

Resumo Este estudo avaliou a influência do peso inicial, período de alimentação e temperatura no ganho de peso e parâmetros biológicos da fase não parasitária, de fêmeas parcialmente ingurgitadas de Rhipicephalus sanguineus alimentadas artificialmente utilizando ponteiras plásticas como dispositivo de alimentação. O dispositivo não alterou a oviposição das fêmeas ou quaisquer outros parâmetros avaliados. Além disso, observou-se que a temperatura de alimentação do grupo não afetou o ganho de peso e a biologia dos carrapatos. Este dispositivo tem um grande potencial para o desenvolvimento de estudos sobre a transmissão de bioagentes, uma vez que proporciona maior ingestão de sangue por carrapatos ixodídeos.

Abstract This study evaluated the influence of the initial weight, feeding period and temperature on weight gain and biological parameters of the non-parasitic phase of partially engorged Rhipicephalus sanguineus females that were artificially fed using plastic tips as feeding devices. The device did not alter the oviposition of the females or any other parameters evaluated. Furthermore, it was observed that the temperature of the feeding the group did not affect the weight gain and biology of ticks. This device has great potential for the development of studies on bioagent transmission because it provides higher intake of blood by ixodid ticks.